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日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點(diǎn)評(píng)

日產(chǎn)Silvia怎么樣專家點(diǎn)評(píng): 問(wèn) 提問(wèn)者：網(wǎng)友 | 2018-08-08

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miRNA通過(guò)與轉(zhuǎn)錄本相互作用關(guān)閉或抑制基因表達(dá)近研究表明們影響了約三成基因miRNA多組織差異表達(dá)讓表達(dá)圖譜分析成研究重點(diǎn)同時(shí)miRNA過(guò)表達(dá)和抑制也近年來(lái)常用研究方法而 Peng Jin(埃默里大學(xué)) 我們使用RNA oligo和載體方法對(duì)于RNA oligo方法我們采用類似siRNA雙鏈miRNA及anti-miRNA來(lái)增加或阻斷特定miRNA活性種方法便于操控細(xì)胞培養(yǎng)特定miRNA活性載體方法有著長(zhǎng)期改變優(yōu)勢(shì)能夠追蹤別細(xì)胞我們利用人工shRNA質(zhì)?；騊ol II表達(dá)載體來(lái)過(guò)表達(dá)特定miRNA對(duì)于miRNA下調(diào)我們要表達(dá)shRNA能產(chǎn)生與miRNA前體莖環(huán)結(jié)構(gòu)互補(bǔ)siRNA要使用miRNA海綿(miRNA sponge)能特定miRNA多目標(biāo)位點(diǎn)表達(dá)報(bào)告基因 Winston Kuo(哈佛大學(xué)) 目前有兩種通用策略:1) 基于載體或病毒miRNA或miRNA反義鏈序列過(guò)表達(dá);2) 外源miRNA雙鏈或反義抑制劑轉(zhuǎn)染方法選擇取決于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 般說(shuō)來(lái)我們傾向于外源試劑轉(zhuǎn)染載體/病毒策略還依賴Drosha/Dicer酶對(duì)轉(zhuǎn)錄本順序加工且必須通過(guò)Exportin 5從核輸出人類癌細(xì)胞系曾報(bào)道過(guò)Drosha和Dicer水平miRNA加工缺陷此外Exportin 5也被認(rèn)細(xì)胞和小鼠模型miRNA生物發(fā)生途徑瓶頸外源過(guò)表達(dá)飽和Exportin 5從而勝過(guò)內(nèi)源小RNA序列極端情況下會(huì)引起細(xì)胞或動(dòng)物死亡外源雙鏈轉(zhuǎn)染直接進(jìn)入RISC復(fù)合物因而繞過(guò)了些陷阱當(dāng)需要持久功能獲得或功能喪失時(shí)還需要載體或病毒穩(wěn)定表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系必須小心地建立采用病毒滴度測(cè)定來(lái)避免上述問(wèn)題 Joshua Mendell(約翰霍普金斯大學(xué)) 對(duì)于miRNA上調(diào)我們常常構(gòu)建表達(dá)載體制備起來(lái)非常簡(jiǎn)單我們只擴(kuò)增miRNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)及些側(cè)翼序列并直接克隆PCR產(chǎn)物有時(shí)候我們也用合成miRNA模擬物來(lái)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞過(guò)表達(dá)miRNA 了抑制miRNA我們般使用市場(chǎng)上反義寡核苷酸我們使用Dharmacon和Exiqon抑制劑都獲得了成功些試劑局限于們只能瞬時(shí)作用了實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定抑制我們開(kāi)始用所謂miRNA海綿們實(shí)際上有著多miRNA結(jié)合位點(diǎn)捕獲轉(zhuǎn)錄本能隔離細(xì)胞有活性miRNA Silvia Monticelli(瑞士生物醫(yī)學(xué)研究所) 我們主要使用慢病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)因我們主要研究原代細(xì)胞而且需要長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)表達(dá)取決于細(xì)胞類型我們也使用lipofectamine或Amaxa來(lái)瞬時(shí)轉(zhuǎn): 回答者：網(wǎng)友

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